Sadržaj
Glavna razlika
Glavna razlika između restriktivnih enzima tipa I i tipa II je u tome što su restriktivni enzimi tipa 1 u usporedbi s restrikcijskim enzimima tipa II, a osim toga, restrikcijski enzimi tipa I čine tri neidentične podjedinice. Dok su s druge strane, restrikcijski enzimi tipa II sastavljeni od dvije identične podjedinice. Nukleaze koje se unutar unutarnjeg položaja urezuju u DNA poznate su kao restrikcijski enzim. Točka u kojoj ovi restriktivni enzimi sijeku sredinu DNK, ali ne na kraju. Za ovo svojstvo restrikcijskih enzima poznati su kao endonukleaze. Ta se ograničenja nazivaju i molekularnim škarama, molekularnim noževima, molekularnim skalpelima ili restrikcijskim enzimima. Mjesto prepoznavanja ili mjesto restrikcije je regija u kojoj ti restrikcijski enzimi režu DNK. Ovo mjesto restrikcije ima najmanje 4-8 baznih parova. Postoje tri skupine ovih restrikcijskih enzima, a to su:
- Endonukleaza restrikcije tipa I
- Endokukleaza tipa II restrikcije
- Endokukleaza tipa III restrikcije
Enzimi za ograničavanje tipa I
Enzimi tipa I su više podjedinice i složena su kombinacija modifikacijskih i restriktivnih enzima. Ovi enzimi režu DNK u nasumičnim točkama, ali daleko od njihove prepoznatljive sekvence. Za ove enzime se znalo da su vrlo rijetki, ali sada smo nakon analize sekvenciranih genoma otkrili da su zajednički. Zaštitni enzimi tipa I ne čine uzorke vezanja gela niti diskretne restrikcijske fragmente, stoga se ne koriste praktički toliko kao enzimi tipa II, ali imaju poseban biokemijski značaj.
Enzimi za ograničavanje tipa II
Zaštitni enzimi tipa II unutar svog mjesta prepoznavanja ili u blizini njihovih mjesta prepoznavanja, na definiranim položajima. Uz to, oni proizvode diskretne uzorke gela i diskretne fragmente. Oni su od velike praktične vrijednosti i koriste se vrlo često. Oni su široko dostupni u prodaji. Većina tih enzima veže se na DNK kao homodimeri, a prepoznaju i slijed DNK koji su simetrični. Neki od ovih restrikcijskih enzima prepoznaju i asimetrične DNK sekvence jer se vežu kao heterodimeri. Neki enzimi prepoznaju i kontinuitete. U teznim sekvencama dvije polovine mjesta susjedne su u sekvenci za prepoznavanje. Neki od ovih enzima prepoznaju i prekidne sekvence u kojima su polovica mjesta odvojena jedno od drugog. Cijepanje koje se događa u DNA ostavlja 5 fosfata s jedne strane i 3 hidroksila s druge strane. Manji su s podjedinicama koje se kreću u rasponu od oko 200-350. Najčešći enzimi tipa II su tip IIS. Oni se cijepe izvan mjesta prepoznavanja na jednu stranu. Normalne su veličine i prepoznaju nizove koji su asimetrični i kontinuirani. Imaju dvije domene, jednu za DNK i drugu za cijepanje DNK. U većini dijelova vežu DNK kao monomere. DNA lanci koji sadrže razna mjesta prepoznavanja, enzimi prepoznavanja tipa II na njih su vrlo aktivni. Druga vrsta enzima tipa II je tip IIG. Imaju restrikcijske i modifikacijske enzime, štoviše, veliki su.
Ključne razlike
- Restrikcijski enzimi tipa I su složeniji u usporedbi sa restrikcijskim enzimima tipa II.
- Enzimi za raspoznavanje tipa I sastoje se od tri neidentične podjedinice. Enzimi za raspoznavanje tipa II sastoje se od dvije identične podjedinice.
- Molekularna masa restrikcijskih enzima tipa I je 400000 daltona. Molekularna masa restrikcijskih enzima tipa II je 20 000 do 100 000 daltona.
- Mjesto rezanja restrikcijskih enzima tipa I udaljeno je 1000 nukleotida od mjesta prepoznavanja. Mjesto rezanja restrikcijskih enzima tipa II nalazi se na istom mjestu prepoznavanja.
- Redoslijed rezanja nije specifičan za restrikcijske enzime tipa I. Redoslijed rezanja specifičan je za restrikcijske enzime tipa II.
- Enzimi tipa I odgovorni su za zaštitu DNK metilacijom, a enzimi tipa II nemaju metilacijsku aktivnost.
- Za aktivaciju enzima tipa I potrebni su ATP, Mg2 + i adenozil metionin. Za aktivaciju enzima tipa II potreban je samo Mg2 +.
- Enzim tipa I ima aktivnost endokuleze i metilaze. Tip II ima samo restriktivnu aktivnost, nema aktivnost endonukleaze ili metilaze.
- Enzimi tipa I identificirani su prije enzima tipa II.
- Tip I identificiran je u dva različita soja E.Coli.
- Primjeri enzima tipa I su, Ecok i EcoB. Primjeri enzima tipa II su, Hind II i EcoRI.
